Opis

• Tytuł:
  Opracowanie i wdrożenie metod badawczych do oceny wpływu materiałów na komórki hodowane w hodowlach 3D, na przykładzie wykorzystania dendrymerów jako nośnika siRNA
• Twórca:
  Białkowska, Kamila
• Współtwórca:
  Uniwersytet Łódzki, Wydział Biologii i Ochrony Środowiska, Katedra Biofizyki Ogólnej
• Opis:
  Najbardziej popularny model hodowli komórkowych, czyli hodowle dwuwymiarowe (2D), nie odzwierciedlają w sposób wystarczający fizjologicznych warunków funkcjonowania komórek. O wiele lepszym modelem są hodowle trójwymiarowe (3D), dlatego też jednym z celów pracy było opracowanie metody hodowli 3D oraz metod badawczych do oceny wpływu materiałów na komórki hodowane w 3D. Ponadto, badano wpływ dwóch rodzajów dendrymerów karbokrzemowych (CBD-1 oraz CBD-2) oraz ich kompleksów z pro-apoptotycznymi siRNA (Mcl-1 oraz Bcl-2) na komórki MCF-7 hodowane zarówno w 2D jak i w 3D. Pomiary potencjału zeta, dichroizmu kołowego, fluorescencyjne z bromkiem etydyny potwierdziły tworzenie się kompleksów dendrymer/siRNA. Badanie elektroforetyczne potwierdziło ochronny wpływ dendrymerów przed degradacją siRNA przez RNazę. Przeprowadzono testy XTT oraz live-dead (analiza cytometryczna), które wykazały, że stosowane dendrymery wpływają na żywotność komórek linii MCF-7 hodowanych w 2D, przy czym im wyższe stężenie dendrymeru tym niższa żywotność. Przyłączenie siRNA zwiększało efekt cytotoksyczny. Bardziej toksyczny okazał się dendrymer CBD-1. Analizy mikroskopowe wykazały, że zarówno CBD-1 jak i CBD-2 transportują siRNA do komórek. Na komórkach linii MCF-7 hodowanych w 3D wykonywano test live-dead (cytometria przepływowa) po 24 lub 48 godzinach inkubacji komórek z wybranymi próbkami oraz po podaniu trzech dawek badanych związków. W przypadku hodowli 3D bardziej toksyczny okazał się dendrymer CBD-2. Najlepsze wyniki z punktu widzenia zastosowania dendrymerów jako nośników siRNA w terapii genowej otrzymano po podaniu trzech dawek CBD-1 w kompleksach z siRNA. Analizy mikroskopowa i cytometryczna potwierdziły transport dendrypleksów do komórek hodowanych w 3D, ale był on mniej efektywny, niż w przypadku komórek hodowanych w monowarstwie.;
  Praca realizowana w ramach projektu Ministerstwa Edukacji i Nauki (wcześniej Ministerstwa Nauki i Szkolnictwa Wyższego) pt. "Doktoraty wdrożeniowe".
• Dostępność obiektu:
  Dostęp otwarty
• Data:
  2022.09.16;
  2022;
  2022.10.25
• Typ:
  PhD/Doctoral Dissertation
• Język:
  polski
• Format:
  application/pdf
• Temat i słowa kluczowe:
  dendrymery;
  dendrypleksy;
  hodowle 3D
• Identyfikator: http://hdl.handle.net/11089/43241
• Dostawca danych:
  Repozytorium Uniwersytetu Łódzkiego
• Czy mogę z tego obiektu skorzystać?:
  poproś o pozwolenie
• Rodzaj zawartości:
  teksty